5）微量元素：硒是**常见的。①无蛋白无血清细胞培养基（proteinfreemidium,PFM）这类培养基完全不含有动物来源蛋白，但仍有部份添加物是植物蛋白的小水解片段或合成多肽片段，以及类固醇***和脂类前体等，以替代动物***、生长因子的作用。其特点是完全没有蛋白或蛋白含量极低，有利于生物制品的分离纯化。④化学组份限定无血清细胞培养基（Chemicallydefinedmedia,CDM）此类培养基是目前**安全、**为理想的无血清细胞培养基，所有成份的浓度都完全明确，即使其所添加的少量蛋白，也是可经过纯化处理，成份明确、浓度确定的蛋白。这类培养基较为理想地减少了生产的可变性，提高了生产工艺的重复性，并有效降低了纯化成本。严格意义上来说，个性化细胞培养基不在细胞培养基的传统分类之列，其具体是指一类根据细胞特性、细胞培养工艺特点、使用者需求习惯而量身定制的细胞培养基，主要目的是提高细胞产率、产品质量、产品安全性和降低血清的使用等。个性化细胞培养基可能是无血清培养基，也可能是低血清培养基，**终是为满足某一种或某一类生物制品的生产需求。2.培养基的基本组分细胞培养基必须含有充分的营养物质。DMEM培养基在实验室中广泛应用于细胞实验。山西减血清培养基进货价
培养实例2和对比培养例2的培养结果比较：兰兹贝格型拟南芥种子在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的萌发率均为100％；在相同条件下培养28d时，与1/2ms生长培养基相比，1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳，在平均株高、莲座叶大小、根长、花朵数量等方面均优于1/2ms生长培养基；并且，采用上述培养方法，不论是1/2cs生长培养基还是1/2ms生长培养基，均能获得形态完整的花粉，且花粉活力高达％，其特点在于选择了兰兹贝格型拟南芥作为培养对象，且选择了高度适中的培养盒进行培养，克服了传统培养方法无法获得拟南芥整个生育期无菌苗的缺点，所获无菌花***可直接用于花*离体培养等研究内容。如图2所示。培养实例3：油菜无菌苗培养与培养实例1不同的地方在于：步骤(1)所用种子为中双11号油菜种子，其余完全同培养实例1。1/2cs生长培养基的培养结果为：中双11号油菜种子在1/2cs生长培养基上的萌发率为100％，培养9d的幼苗，表现为植株健壮、平均株高为，叶色浓绿，茎秆粗壮、平均茎中粗为，根系发达、平均根数为(>)、平均主根长为。如图3所示。对比培养例3：将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基，其余完全同培养实例3，1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。广西减血清培养基供应商无血清培养基适用于需要无血清环境的细胞。
因为解冻时可能会有营养成份析出，影响培养效果。正常情况下于2~8℃避光保存，使用前从冰箱取出，放入室温进行平衡。通常的液体培养基有效期是6个月到12个月。液体细胞培养基尽量避免长期贮存，其中的谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解，如果细胞生长不良，可考虑检测培养基中的谷氨酰胺含量确定是否再补加谷氨酰胺。市售商业化液体细胞培养基有具体的有效期，对于使用干粉细胞培养基自行配制成液体以后，也应低温（2~8℃）贮存。除培养基中如谷氨酰胺易降解之外，培养基中的其他成份随着温度的升高也可能会发生降解或是析出。5.细胞培养基使用过程中常见问题分析由于大多数细胞适宜的pH为，偏离此范围可能对细胞生长产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养的细胞一般对pH变动耐受力差，无限细胞系耐受力强。因此，原代培养时，培养液中的缓冲系统就显得较为重要。一般的细胞培养基采用的都是平衡盐系统，但不同的培养基或是同一系列的培养基所用平衡盐系统不同，如199系列、MEM系列均有Hanks’系统的培养基及Earle’s系统的培养基。有些培养基不是上述常规的平衡盐系统，例如RPMI1640培养基、F12培养基。
1)、初代培养：绣球外植体，将叶片剪去，自来水冲洗干净。在超净工作台上把已经冲洗干净的外植体浸入75％酒精中消毒30s，用无菌水冲洗3～4次。使用白猫漂白水和无菌水按1：4的体积比配制消毒液，将外植体放入消毒液浸泡40min，其中白猫漂白水为上海白猫(集团)有限公司生产的“白猫”牌家用漂白水。消毒完成，将外植体接种到诱导培养基中培养，建立无菌再生系统，诱导培养环境为光照强度1500lx条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养6～8周。其中诱导培养基为ms+～～，诱导培养基的ph值为。(2)、继代培养：以建立的无菌再生系统为对象，将无菌外植体转接到增殖培养基，其中增殖培养基为ms+～～，培养环境为光照强度1500lx条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养8～12周。每隔8～12周转接入新的增殖培养基，增殖培养基的ph值为。(3)、生根培养：经过继代培养的绣球组培苗，取2～3cm的顶芽，放入生根培养基，其中生根培养基为1/2ms+～～，生根培养基的ph值为。诱导培养环境为光照强度1500lx条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养8～12周。。MEM培养基适合多种类型的细胞培养实验。
可通过在细胞培养基中添加一些保护剂，降低细胞-气体和细胞-液体的表面张力，减少气泡的形成。4.细胞培养基的**及储存**方式及注意事项细胞培养基**的方式分为高压**和膜过滤**，不同的培养基由于其营养成份不同，**方式也可能不同。①高压**某些培养基（如MEM）可进行高压**，这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压**后才加入。另外可用耐高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺。可高压**的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到**效果及营养成分的**小损失，不需将**时间延长。绝大多数细胞培养基不适宜高压**。因培养液中常含有维生素、蛋白质、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用过滤消毒以除去**。可供过滤**使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。膜过滤**是当前较为常用及便捷的一种方法，常采用μm孔径的滤膜，部份采用μm孔径。与高压过滤方式相比，滤膜具有使用期限且价格较高，但对细胞培养基的营养成份破坏性较小。通常液体细胞培养基避免-20℃冻存。F12培养基确保了实验结果的一致性和可靠性。山西减血清培养基进货价
RPMI1640培养基确保了细胞的高效生长。山西减血清培养基进货价
一般情况下应调pH比所需值低～，因过滤**后，pH值会升高约。8）在细胞培养过程中，建议不加或加少量的***，如血清的浓度较低则所加***的量也要相应降低一些。9）建议用1NHCl或1NNaOH来调节培养基的pH，因为用碳酸氢钠来调对培养液的渗透压影响比较大。如下图所示：图6-1MEM培养基（SLM，MD611）在pH值相同情况下所加的碳酸氢钠、氢氧化钠的量及所对应的培养液渗透压图6-2199培养基（MD502）在pH值相同情况下所加的碳酸氢钠、氢氧化钠的量及所对应的培养液渗透压培养基**培养基的**方法主要有两种，高压**及um微孔滤膜过滤**。与过滤相比，高压**的工作强度小，相对便宜，失败率低，但易造成营养成分的流失。高压**某些培养基（如MEM）可进行高压**，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。其中不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，可在高压**后加入。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。为保证高压**的效果，**设备的验证很关键，可高压**的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到**效果及营养成分的**小损失，因此不需将**时间延长。过滤**大多数培养基采用～μm孔径的微孔滤膜进行过滤**，并且已成为培养基**的发展方向。山西减血清培养基进货价
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